手工制作带金属种植体骨组织磨片的方法

　　金属种植体坚硬，普通硬组织切片机不能满足要求，自动磨片机价格昂贵，且国内没有同类机器。我们经过试验初步掌握了手工制作带金属种植体骨组织磨片的方法，现介绍如下。

　　1.材料：Leitz 1600锯割切片机(德国产)，360目、500目、1 000/1 200目金钢砂耐水砂纸，石蜡油，氰基丙烯酸酯，甲基丙烯酸-β-羟乙酯，过氧化苯甲酰，二甲基亚枫。

　　2.组织处理：将带有钛合金种植体的骨组织，锯成1.5 cm×1.0 cm×0.8 cm的骨块，于10%甲醛中固定24 h，入70%酒精中脱水并脱至95%酒精为止。

　　3.配制浸泡液：取甲基丙烯酸-β-羟乙酯溶液100 ml，过氧化苯甲酰1 g混合，在磁力搅拌器上搅拌直至过氧化苯甲酰颗粒完全溶解。

　　4.配制包埋液Ⅰ、Ⅱ：取浸泡液15 ml，加入二甲基亚枫1 ml并搅

拌均匀。包埋液Ⅱ的配制见参考文献［1］。

　　5.浸泡与包埋：将脱水后的组织块放入浸泡液中浸泡8 h后，在-20 mm Hg的真空环境中放置1 h［2］，以使浸泡液完全渗入组织中。然后取浸泡后的骨组织于包埋框中，倒入包埋液，在70℃的烤箱内聚合12 h后取出。在包埋块上倒入包埋液Ⅱ，30 min后即可取出并切片。

　　6.磨片前的准备：切割包埋块，暴露组织与种植体的结合面。取下包埋块用1 000/1 200目的细砂纸在水中打磨光滑，冲洗后置于武兆发改良Mallory一步三色法染色液中进行染色［3］，然后阴干至次日。将染色后的组织用氰基丙烯酸酯粘合在载玻片上，载玻片的组织面朝上。将组织固定在锯割切片机上切成300 μm厚的切片。

　　7.制作磨片：手持切片在涂有液体石蜡的砂纸上打磨，开始选用360目砂纸，磨至200 μm时改用500目砂纸，再磨至100 μm厚时，用1 000/1 200目的细砂纸仔细打磨，将切片磨至约30 μm厚。此时用无水酒精冲洗切片上的石蜡油，再用蒸馏水冲洗切片表面。最后脱水，树脂封片，至此带金属种植体的骨磨片即制作完成。

　　此时，磨片可清楚地显示种植体与骨组织界面情况，并可清楚地观察到哈弗氏管。

　　我们的体会：

　　1.浸泡组织时最好经真空处理，以使包埋液浸入组织缝隙中，否则在磨片过程中，金属碎屑可进入组织，即使行超声清洗也不易将其去除，从而影响最终结果。

　　2.染色后必须阴干至次日才可粘合：包埋剂具有亲水性，染色后包埋块由于吸水而肿胀，导致骨组织面下陷，故充分阴干，以使包埋剂中的水分挥发，包埋剂面与组织面平齐后才能粘合。

　　3.必须以石蜡油为研磨剂：包埋剂吸水后，组织面变涩而影响研磨速度和质量，故不可用水研磨；在油性介质下可大大提高工作效率［4］。研磨过程中不宜过快，否则组织面会受到较大的破坏。

　　4.磨片前必须组织染色：组织与载玻片处于粘合状态，若磨片制成后再染色，可以使组织与玻片分离，或包埋剂由于浸泡而肿胀，以致最终影响观察。